埃澤思細胞凍存液

ES/iPS Crypreservation Media

一(yi)、產品基本(ben)信(xin)息

二、產品簡介

ES/iPS 埃澤思細胞凍存液是埃(ai)澤思(si)生物（Applied Cell®）自主開發的一款無血清、無需(xu)程序降溫的干細胞凍 存液，適用于人(ren)多能干細胞（hES/hiPS）的凍存。本產品生產過程遵循 ISO9001 體系(xi),并符合 GMP 指導(dao) 原則(ze)。

三(san)、產品特(te)性(xing)

? 安全：無外(wai)源蛋(dan)白成分，大大降(jiang)低各類病(bing)毒、霉菌和支原(yuan)體(ti)等的污(wu)染風險。

? 穩定：全程無血清生(sheng)產(chan)，批次間(jian)差異小(xiao)。

? 高效(xiao)：凍存細胞復蘇率高于(yu) 90%。

? 簡單：即用(yong)型產品，且無需程序降溫可直(zhi)接(jie)-80℃過夜后轉移至(zhi)液氮中長(chang)期保存(cun)。

四(si)、產品內容

五、相(xiang)關產品

人多能干細胞培(pei)養基（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001000）

人多能干(gan)細(xi)胞(bao)消化液（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001008）

無血清細(xi)胞凍存(cun)液(ye)（治療級）（Applied Cell®:AC-1001006）

即用型基質(zhi)膠（Applied Cell®: Cat. no. C-1001007）

六、細胞凍存操(cao)作方法

1. 準備對數期生長的干細胞，加入人多能干細胞消化液（AC-1001008）消化 3~5 min，用 2mL 人多能干細胞培養基（AC-1001000）制備成細胞懸液；

2. 1200 rpm 3min 離心，棄上清，用 1.5-2mL ES/iPS 細胞凍存液重懸細胞，細胞密度 1×106~1×107 /mL；

3. 轉移至(zhi)凍存(cun)(cun)(cun)管中，無需程序降溫(wen)，直(zhi)接(jie)將(jiang)待凍存(cun)(cun)(cun)細胞置(zhi)于 -80℃過夜，后轉移至(zhi)液氮中長(chang)期保存(cun)(cun)(cun)，凍 存(cun)(cun)(cun)時注意直(zhi)立放置(zhi)凍存(cun)(cun)(cun)管；

七、細胞(bao)復(fu)蘇(su)

1. 基質膠包被培養板：取出 6 孔板/12 孔板，每孔內加入 1 mL/0.5 mL 即用型基質膠(jiao)（AC-1001007）， 輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使基質膠*覆蓋皿底，置于 37℃培養箱中孵育 1h~2h，實驗前拿出并置于 超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡 20min。如果暫時不用，可用 Parafilm 封口后 2-8℃ 儲存，并 于 1 周內使用。

注意：①一支凍存的干細胞的數量在 1×106cells/mL 左右，對應 6 孔板 1 孔；②即用型基質膠對溫 度敏感，即用即拿，用完后立即放回 4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質膠液面所及的瓶身，影響 基質膠質量。

2. 先將 2~3mL 的干細胞培養基加入 15mL 離心管中備用。

3. 解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入 37℃溫水中，快速搖動，使其在 1~2min 內快速解凍； 注意：細胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。

4. 離(li)心(xin)：凍存(cun)管中(zhong)的凍存(cun)液解(jie)凍后，將其(qi)逐(zhu)滴(di)加入含有干細胞培養基的 15mL 離(li)心(xin)管中(zhong)，將 15mL 離(li)心(xin) 管置于低(di)速離(li)心(xin)機中(zhong)配比平衡后，1200 rpm 離(li)心(xin) 3min；

5. 重懸：離心后棄上清加 1mL 人多能干細胞培養基對干細胞沉淀進行吹吸混勻，吹吸 3~5 次左右。

6. 接種：吹(chui)吸均勻(yun)(yun)后，將已經平衡好(hao)(hao)的即用型基(ji)質膠(jiao)棄掉，將吹(chui)打均勻(yun)(yun)的干細胞(bao)懸(xuan)液加入到(dao)已經包(bao)被 好(hao)(hao)的 6 孔(kong)板中(zhong)，并(bing)補全每(mei)孔(kong) 2mL 培養(yang)體系。

7. 培養：接種后的 6 孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細胞密度以及細胞團塊大小，呈 4 個 細胞以上的團塊較合格，水平十字輕輕晃動 6 孔板/12 孔板使細胞均勻分布。并置于 37℃，5% CO2 的恒溫培養箱培養，第 2 天觀察細胞貼壁情況；

八、細胞(bao)形態圖

九、質量控制(zhi)