氣相色譜儀驗證

1．氣相(xiang)色譜儀介紹(shao)

氣(qi)相(xiang)色譜儀是(shi)一種多組(zu)(zu)份混(hun)合物的分離、定性、定量的儀器(qi)，利用試樣中各(ge)組(zu)(zu)分在氣(qi)相(xiang)和固定相之間分(fen)配系數不(bu)同(tong)進行(xing)分(fen)離的，顧名思義是(shi)以氣體為流動相，采用沖(chong)洗法的柱色譜(pu)技術，主(zhu)要用于(yu)分離(li)分析易揮發的物質。氣相(xiang)色譜中常用(yong)的載氣有氫氣、氮氣、氬氣，純度要求99。995%以上，化學惰性好，不與有關物質反應。適用于易揮發有機化合物的定性、定量分析。對非揮發性的液體和固體物質，可通過高溫裂解，氣化后進行分析。氣相色譜儀具有：高靈敏度、高效能、高選擇性、分析速度快、所需試樣量少、應用范圍廣等優點。氣相色譜法現在已成為一種成熟且應用廣泛的分離復雜混合物的分析技術，在醫藥研究、食品分析、石油化工、環境監測、生物化學等領域得到廣泛的應用。

2．氣(qi)相色譜儀的原理

氣相色譜儀主要(yao)有進(jin)樣系(xi)統、分(fen)(fen)離系(xi)統、溫控系(xi)統、以及(ji)檢測系(xi)統四(si)大(da)部分(fen)(fen)組(zu)成。原理是：利用試樣中(zhong)各(ge)組(zu)分(fen)(fen)在氣相和固(gu)定相之間的分(fen)(fen)配系(xi)數(shu)不同，當汽化后(hou)的試樣被載氣帶(dai)入色(se)譜柱(zhu)(zhu)中運(yun)行(xing)時，由(you)于固定相對(dui)各組分的吸附或(huo)溶解能(neng)力不同，因此各組份在色(se)譜柱(zhu)(zhu)中的運(yun)行(xing)速度也就不同，經過一定的柱(zhu)(zhu)長后(hou)，彼此分離(li)，按(an)順序離(li)開色(se)譜柱(zhu)(zhu)進入檢測器，產生(sheng)的離(li)子(zi)流訊(xun)號經放大后(hou)，在記錄(lu)器上描繪出各組分的色(se)譜峰，從而完成了對(dui)試樣全自動的定(ding)性定(ding)量分析(xi)。

3．為什么(me)氣相色譜儀(yi)要做(zuo)驗證呢？

氣相色(se)(se)譜(pu)(pu)儀具有效能(neng)高(gao)、靈敏度高(gao)、選擇(ze)性(xing)強、分(fen)(fen)(fen)(fen)析速度快(kuai)的(de)(de)(de)優點，這就(jiu)意味著某個(ge)系(xi)統參數出(chu)問(wen)題或(huo)者產(chan)生誤差(cha)都導致結果(guo)(guo)偏(pian)離。所(suo)以對氣相色(se)(se)譜(pu)(pu)儀做驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)是(shi)為了保(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)氣相色(se)(se)譜(pu)(pu)儀分(fen)(fen)(fen)(fen)析檢(jian)測(ce)出(chu)的(de)(de)(de)結果(guo)(guo)準確、可靠，必須(xu)對所(suo)用到的(de)(de)(de)組成系(xi)統各部分(fen)(fen)(fen)(fen)進行驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)，以證(zheng)(zheng)(zheng)明該(gai)(gai)系(xi)統符(fu)合(he)(he)檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)目(mu)的(de)(de)(de)和要(yao)求，保(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)各系(xi)統都處與(yu)正(zheng)常工作范(fan)圍內，這就(jiu)是(shi)儀器(qi)(qi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)。從本(ben)質上講，儀器(qi)(qi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)就(jiu)是(shi)根(gen)據檢(jian)測(ce)物質的(de)(de)(de)要(yao)求，預(yu)先對儀器(qi)(qi)設(she)置(zhi)一定的(de)(de)(de)參數范(fan)圍，選擇(ze)合(he)(he)適的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)器(qi)(qi)，并通過(guo)設(she)計合(he)(he)理的(de)(de)(de)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)來驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)該(gai)(gai)儀器(qi)(qi)是(shi)否(fou)符(fu)合(he)(he)檢(jian)測(ce)項目(mu)的(de)(de)(de)要(yao)求，進而使檢(jian)測(ce)結果(guo)(guo)可信(xin)。儀器(qi)(qi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)是(shi)保(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)整(zheng)個(ge)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)是(shi)否(fou)能(neng)成功的(de)(de)(de)先決條件(jian)，只(zhi)有經過(guo)驗(yan)(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)(zheng)的(de)(de)(de)儀器(qi)(qi)，確保(bao)該(gai)(gai)儀器(qi)(qi)各部分(fen)(fen)(fen)(fen)都在良好的(de)(de)(de)情(qing)況下才能(neng)用于物質成分(fen)(fen)(fen)(fen)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)(fen)(fen)析檢(jian)測(ce)，這樣保(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)檢(jian)測(ce)結果(guo)(guo)準確可信(xin)，即(ji)減小誤差(cha)，也節(jie)省(sheng)人力財力。

4．氣相色譜儀驗證項目

（1）安裝(zhuang)確(que)認

a. 文件確認

b. 附件確認

c. 安裝環境確認

d. 安裝(zhuang)情況確認

（2）運行功能確認

a. 運行功能確認

b. 軟件控制功能測試

c. 載氣流速穩定性(xing)測試

d. 柱溫(wen)溫(wen)度穩定性測試

e. 程序升(sheng)溫(wen)穩定(ding)性測試

（3）性(xing)能確認

a. 基線(xian)噪聲測(ce)試

b. 基(ji)線漂移測(ce)試

c. 靈敏(min)度測(ce)試(shi)

d. 檢測(ce)限測(ce)試(shi)

e. 定(ding)性(xing)重復性(xing)測試

f. 定量重復(fu)性(xing)測(ce)試

5．氣相(xiang)色譜儀使用步(bu)驟

a. 將處理(li)好的試(shi)樣轉移至上(shang)機專用瓶(ping)中，電腦設置(zhi)參數；

b. 打開(kai)(kai)色譜(pu)儀電源開(kai)(kai)關；打開(kai)(kai)載(zai)體，等載(zai)氣壓(ya)力穩定，調節(jie)節(jie)壓(ya)閥(fa)，至裁其氣壓(ya)力為(wei)，0、06~0.1MPa輸入柱(zhu)溫(wen)，檢測(ce)器(qi)溫(wen)度，進樣器(qi)溫(wen)度，檢測(ce)靈敏度，衰減和各(ge)(ge)個(ge)加熱(re)爐的最高(gao)溫(wen)度限制等各(ge)(ge)項參數(shu)。激活程序(xu)；

c. 根據測試要求調節(jie)空氣(qi)、氫(qing)氣(qi)和載氣(qi)的流速(su)比(bi)，如空氣(qi)、氫(qing)氣(qi)和氮氣(qi)的流速(su)比(bi)為10:1:1，按操作面板上的點(dian)火鍵，聽到(dao)輕微的爆鳴(ming)聲，或可以看(kan)到(dao)色譜(pu)儀工(gong)作站中基(ji)線具有(you)大幅度(du)的跳動，說(shuo)明點(dian)火成功；

d. 當操作面板的顯示屏(ping)上(shang)柱溫，檢測器溫度和進(jin)樣器溫度恒定(ding)后(hou)，“ready"鍵指(zhi)示燈變為(wei)綠色，說明儀器已準(zhun)備就(jiu)(jiu)緒或觀察色譜(pu)工作站(zhan)基(ji)線是否平穩，若基(ji)線平穩成(cheng)直線就(jiu)(jiu)可以(yi)進(jin)樣；

e. 進樣器量(liang)程一般為10μL，取樣前用溶(rong)劑反復(fu)清洗，再用待測樣品(pin)抽洗數次 然后取樣，進樣，按操作(zuo)面板面板上(shang)的開(kai)始(shi)鍵，并點擊工作(zuo)站中的開(kai)始(shi)；

f. 檢測完后待柱溫降到室溫，關閉色譜儀的電源開關。關閉氣體發生器的開關

g. 收拾試驗臺，整理儀器，實驗臺，地面。

6．氣(qi)相色譜儀使用的注意事項如下

(1)儀(yi)器開機后(hou)應先通(tong)載氣(qi)再升溫，待檢(jian)測器溫度(du)高(gao)于100℃時才(cai)能通(tong)氫(qing)氣(qi)點火。

(2)進樣(yang)前對進樣(yang)針檢查，檢查它是否(fou)彎曲或者堵(du)塞，彎曲就不能使用。如果堵(du)塞可以采用有機溶劑利(li)用相(xiang)似相(xiang)溶的(de)原(yuan)則，重復(fu)清洗幾次(ci)便(bian)可以再次(ci)使用。

(3)隔墊螺(luo)(luo)母(mu)主要防(fang)止(zhi)隔墊密封不緊漏氣，隔墊螺(luo)(luo)母(mu)是有壽命的，一般使用次數200次左右(you)，實驗人員要注意及時更換。

(4)本檢測器是高靈敏(min)度檢測器，必須用高純度的載氣(qi)（99.99%），而且載氣(qi)、氫氣(qi)及空(kong)氣(qi)應經凈化器凈化。

(5)在使用儀器最高靈敏度檔或程序升溫分析時所用的(de)色譜(pu)柱應經過(guo)*老化。

(6)檢(jian)測器(qi)在高溫(wen)工作時(shi)或關機后短時(shi)間內(nei)，請不(bu)要用手直接接觸檢(jian)測器(qi)表(biao)面，以(yi)免燙傷。

(7)檢測過程(cheng)中產生的廢棄(qi)液(ye)體(ti)和(he)耗材一定要規范處理(li)

7．問題解(jie)答

(1)  檢測前的準備有哪些？

a.  首先我們要檢查儀器各個系統是否完好，連接完成，儀器是否能夠正常工作；

b.  準備我們需要用到的標準物質試劑，以及樣品前處理所需要用到的設備試劑等；

c.  按照標準要求對樣品進行前處理工作，準備進樣。

(2)  請問操作氣相色譜的注意事項具體有哪些?

a.  首先保持環境清潔干凈，環境溫度在5℃-35℃，相對濕度小于等于80%RH。

b.  每次使用時應保持室溫、相對濕度恒定。

c.  關機操作時，要使儀器進樣口和檢測器溫度降到80℃以下，柱溫箱降到50℃以下，最后關閉氮氣。

d.  如突然停電，要立即關閉氫氣主閥，并打開柱箱散熱，氮氣保留一段時間再關。FID檢測器點火不燃時，可將FID檢測器升到300℃，并檢查氫氣鋼瓶低壓表是否正常。

e.  最重要的一點，就是一定要嚴格遵守標準操作規范來進行試驗，任何不規范的操作都可能對檢測結果造成極大的差異。

(3)  對于氣相色譜儀的日常維護有什么具體要求嗎?

a.  首先定期更換進樣隔墊，在實際樣品處理過程中應用微孔濾膜過濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒；

b.  進樣量要小；

c.  色譜柱要定期維護在使用新柱前或放置比較久的色譜柱需預先老化以除去柱中殘留的溶劑。

(4)  選擇老化溫度時應考慮以下幾點：

a.  足夠高以除去不揮發物質；

b.  足夠低以延長柱壽命和減小柱流失；

c.  老化溫度越低老化時間應越長；

d.  按實際工作時的柱溫程序重復升溫，以使色譜柱得以較好老化。一般檢測完畢柱溫應升至比檢測溫度高20~30℃以除去柱中殘留的溶劑，使用結束或柱子長時間不使用時，應堵上柱子兩端以保護柱子中的固定液不被氧氣和其它污染物所污染。

(5)  氣相色譜柱有填充柱和毛細柱之分，而大多數情況下我們都選擇毛細柱來分析樣品，為什么?

填充(chong)柱(zhu)和毛細(xi)(xi)柱(zhu)兩(liang)者(zhe)的(de)區(qu)別在(zai)于固(gu)定相(xiang)的(de)裝(zhuang)載方式不同，填充(chong)柱(zhu)固(gu)定相(xiang)為(wei)柱(zhu)內(nei)裝(zhuang)載的(de)顆(ke)粒狀吸附(fu)劑(氣固(gu)色譜)或涂敷在(zai)惰性固(gu)體(ti)顆(ke)粒上的(de)固(gu)定液(ye)(氣液(ye)色譜)，而(er)毛細(xi)(xi)柱(zhu)中固(gu)定相(xiang)則是涂敷或鍵合于毛細(xi)(xi)管的(de)內(nei)壁上。這就導致了(le)填充(chong)柱(zhu)短而(er)粗(cu)(內(nei)徑在(zai)2~4mm，長度(du)為(wei)1~10m )，毛細(xi)(xi)柱(zhu)長而(er)細(xi)(xi)(內(nei)徑在(zai)0.2~0.5mm，長度(du)為(wei)25~100m )，相(xiang)比(bi)之下(xia)毛細(xi)(xi)柱(zhu)的(de)優點有(you)以下(xia)兩(liang)點，一(yi)是：柱(zhu)效高(gao)，分(fen)離效果好；二是：分(fen)離速(su)度(du)快，尤其是對于復雜(za)基體(ti)多組分(fen)樣品。

公司(si)背景介紹：

華譜&澤恒是專注于為生物制藥行業提供實驗室儀器計量校準、GMP驗證服務/3Q驗證/設備確認/廠房驗證的專業服務商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程/驗證等事業部的質控外包服務。

我們活躍于許多關(guan)鍵(jian)市場領域(yu)，從細胞/基(ji)因治療領域(yu)、抗體(ti)藥方向、干細胞治療到疫苗生(sheng)(sheng)(sheng)產等生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)制(zhi)藥領域(yu)，一直以來(lai)都(dou)是圍繞(rao)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)醫藥客戶實(shi)現讓“讓制(zhi)藥體(ti)系更(geng)安全"為使(shi)命，提高服(fu)務的效率、降低行(xing)業的成本、踐行(xing)好的客戶服(fu)務體(ti)驗。自主品牌：華(hua)譜（上海）檢測(ce)技術有(you)限公司、澤恒(heng)計量檢測(ce)（北京(jing)）有(you)限公司。